阴性or阳性？再谈金标法结果判读

作者 | 蔡栋昊、李蔼文、江锦鸿

单位 | 广东省第二中医院检验科

细节来自于用心。认真做事只是把事情做对，用心做事才能把事情做好。

前言

金标试纸作为临床上常见的一种检测方法，对于检验人来说再常见不过了。由于其操作简单、快捷，应用极为广泛。近日，笔者通过在临床实际工作中遇到一个小细节，引发了一点思考：小小金标法，背后也有大天地。借此与各位同行分享。

案例经过

某天，窗口送了个大便轮状病毒检测。科室用的A群轮状病毒胶体金法检测试剂，按照说明书要求，勺取了一勺大便标本，加入标本稀释管，混匀，折断盖帽，滴加2-3滴混匀后标本至加样区，10分钟后观察结果。

10分钟之后，笔者观察了试纸条，对照线显色，检测线不显色，搭班同事双人核对了之后，便以阴性发出报告。因为刚好窗口有其它标本送来，发完结果便去忙了。

大约过了半个小时忙完坐下来，看到刚刚的金标试纸，居然变成了明显的阳性结果。突然心里一愣，刚刚难道看错结果啦？搭班同事，也表示疑惑。

查阅说明书，每一步操作均严格按照试剂盒说明书进行，但为何出现如此明显的阴阳反差？试剂说明书上的一句话引起了笔者注意：5-10分钟内判断结果，结果判断不可超过10分钟。

笔者印象中，几乎所有的金标法试剂盒都会有针对判读时间的要求，但是在临床工作中由于放置时间过长导致阴阳结果变化确实少见，因此以前也没有详细地学习了解过这句话背后的方法学根据。

为了验证进一步是否由于放置时间超过判读时间导致的假阳性，笔者拿了刚刚的标本，重新做了一次试验，并在10min、20min、30min、40min、50min时观察反应情况，结果如下图所示（图1）。

图1 患者标本随时间变化反应条带显 况

从上图结果可以看到，10min时标本呈阴性反应、随着时间延长，20min时检测线开始出现反应，呈若隐若现状，随时间延长反应线显色逐步加深，40min和50min时检测线已经明显显色。

为进一步验证，观察时长对反应结果的影响，笔者又拿了一个健康体检者的粪便标本，重复上述试验。结果显示，确实随着时间逐渐延长，健康体检者粪便标本检测线位置也可见若隐若现显色（图2）。

图2 体检人群标本随时间变化反应条带显 况

案例分析

经过上面的实验探究，让我们充分认识到规定时间内观察结果的重要性。那么，到底是由于什么原因引起的这种假阳性的出现呢？

接下来，让我们从原理入手重新认识下金标法。

图3 金标法原理示意图（注：图片来源于网络）

金标法可分为层析法和斑点渗透法[1]。本案例中所用的A群轮状病毒检测试剂盒采用的是免疫层析双抗体夹心法原理。首先在NC膜上检测区包被A群轮状病毒抗体，同时用胶体金标记A群轮状病毒单克隆抗体。

检测时，如果标本内含有A群轮状病毒时，标本中的病毒可与检测卡前端“胶体金-抗体”结合，形成免疫复合物。复合物延膜带层析移动，并在包被了抗体的检测区形成一条红色线，则判定为阳性；如标本内不含A群轮状病毒时，检测区不会形成红色线，判定为阴性。

因为层析在有效时间内是从样品垫端向NC膜单向流动，超过判断时间，由于NC膜面的持续蒸发，会导致层析方向由吸水滤纸端往NC膜方向逆流，有色标记物持续释放，引起假阳性。这也解释了为什么超过规定时间判读时会影响结果的判读，导致结果不可靠。

案例总结

在本案例中，通过一个临床工作中的小细节，我们针对说明书上普普通通的一句话进行了延伸探究，加深了我们对于金标法的认识。哪怕是临床上再普通不过的金标试纸，但其实也是蕴含着很多细节问题。这也再次强调了标准化操作规程（SOP）在质量体系中的重要性[2]。

SOP的精髓，就是尽可能地将相关操作步骤进行细化、量化和优化，当实验室编写项目SOP时，必须对整个试验及说明书有个充分的了解，并将积累下来的技术、经验，以标准的格式记录在文件中，使操作人员通过相同程序完成并保持结果的一致性。试验前，一定要好好地阅读试剂盒说明书，并严格按照试剂盒说明书进行操作。经过这个案例，也提醒各位检验人，“调好闹钟，结果可靠更及时哦！”。

专家点评

金标法是目前实验室使用比较广泛，具有一定的灵敏性、特异性，操作方便、快捷的体外诊断方法。一般采用抗原抗体反应的层析法或斑点渗透法，测定结果在规定时间内，可通过肉眼观察到显色结果。正因为操作简单，许多实验室工作人员因为工作的忙碌而忽略掉背后检测的方法学原理及操作的标准化。难能可贵的是，笔者通过日常工作中微小的细节，敏锐地察觉到这阴阳性变化后可能有更深层的原因，对结果的规范发放起到警示作用。这充分体现了标准化操作规程在质量体系中的重要性，也说明了阅读理解说明书的重要性，只有严谨的工作态度及严格的执业制度，检验技术才能发展得越来越远。

点评专家：谭俊青，主任技师，广东省第二中医院检验科主任

参考文献

[1]王兰兰,许化溪.临床免疫学检验[M].第5版.北京：人民卫生出版社，112-114.

[2]范群，王江南.医学检验标准化操作实例分析[J].现代商贸工业,2009,21(17):292-293.

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编辑：徐少卿 审校：陈雪礼